明胶水解试验,大肠杆菌和枯草芽孢杆菌哪个是阳性

实验

大分子物质的水解试验

一、目的要求

1
．证明不同微生物对各种有机大分子的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的
酶系统；

2
．

掌握进行微生物大分子水解试验的原理和方法。

二、基本原理

微生物的胞外酶（如淀粉酶、脂肪酶等）将大分子物质的分解过程可以通过观察细菌
菌落周围的物质变化来证实。

三、器材

1
．菌种
：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，铜绿假单胞菌，普通变形杆菌。

2.
培养基
：固体油脂培养基，固体淀粉培养基，明胶培养基试管，石蕊牛奶试管，尿素
琼脂试管

3.

溶液或试剂
：革兰氏染色用卢戈氏碘液。

4.

仪器或其他用具
：无菌平板，无菌试管，接种环，接种针，试管架。

四、操作步骤

1
．淀粉水解试验

制成淀粉培养基平板后，将平板分为四个区域，划线接种枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、
金黄色葡萄球菌及铜绿假单胞菌后置于
37
℃培养
24h
。
观察各细菌的生长情况，
并滴加少
量碘液于平皿中。若菌苔周围有透明圈，说明水解反应阳性。透明圈大小可初步判定该菌
水解淀粉酶的能力强弱。

2
．

油脂水解试验

制成油脂培养基平板后，同样划线接种上述四菌株，置于
37
℃培养
24h
后观察各细
菌的菌苔颜色，若出现红色斑点，则为脂肪水解阳性。

3
．

明胶水解试验

在明胶培养基中穿刺接种枯草芽孢杆菌、大肠杆菌及金黄色葡萄球菌，置于
20
℃培
养
2
～
5d
后观察液化情况。

4
．

石蕊牛奶试验

接种普通变形杆菌和金黄色葡萄球菌于石蕊牛奶培养基中，置于
35
℃培养
24
～
48h
后观察培养基颜色变化情况。石蕊在酸性条件下为粉红色，碱性为紫色，而被还原时为白
色。