糖异生不是糖酵解的逆反应。糖酵解过程中有三步不可逆反应，在糖异生途径之中须由另外的反应和酶代替。这三步反应是：① 丙酮酸转变成磷酸烯醇式丙酮酸，有2个反应组成，分别由丙酮酸所化酶和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化；② 1，6-双磷酸果糖转变成6-磷酸果糖，由果糖双磷酸酶催化；③ 6-磷酸葡萄糖水解为葡萄糖，由葡萄糖-6-磷酸酶催化。
