所谓引物的Tm值，到底有多少意义

Tm较低，而且熔解温度范围较宽；离子强度较高时，Tm较高，熔解温度范围较窄。

DNA溶液中离子强度低时，Tm较低，而且熔解温度范围较宽；离子强度较高时，Tm较高，熔解温度范围较窄。因此，在表示某一来源DNA的Tm值时，必须指出其测定条件。

在一定条件下Tm高低由DNA分子中的G-C含量所决定。G-C含量高时，Tm值比较高，反之则低。这是因为G-C之间的氢键较A-T多，解链时需要较多的能量之故。Tm值和G-C的含量可用二一个经验公式表示：（G—C）%=（Tm-69.3）×2.44。

扩展资料：

引物使用的相关要求：

1、PCR扩增产物长度： 引物的产物大小不要太大，在80-250bp之间都可；80～150 bp最为合适（可以延长至300 bp）。

2、引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链为T时，错配的引发效率大大降低，G、C错配的引发效率介于A、T之间，所以3′端最好选择T。

3、引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端相似性较高的序列，否则容易导致错误引发。降低引物与模板相似性的一种方法是，引物中四种碱基的分布最好是随机的，不要有聚嘌呤或聚嘧啶的存在。

参考资料来源：百度百科-Tm值

Tm值的定义，是两段互补的碱基序列解链50%时的温度。一般的常识是，在设定PCR的program时，Tm值有非常重要的参考意义。

我们设计引物时，经常要在引物5’端加上酶切位点，保护碱基，Kozak等一大串非结合序列。

一般将公司给出的两段引物较低的一个Tm-8℃开始，2℃一个梯度向上递增，到两段引物中较高的一个Tm+2℃左右做梯度PCR，一般做5~6个梯度就可以了，不知我的这个经验大家同意不同意。