基因工程技术首先要获取目的基因:获取目的基因的途径是从生物中直接提取或人工合成。从生物中直接提取则是要构建基因文库。反转录法属于构建基因文库还是人工合成?获取目的基因的方法是:1从基因文库中获得。目的基因片段的获取:目的基因的组成:一个能转录翻译的结构基因应包括转录启动区、核糖体识别区、编码区、和转录终止区。
获得途径:1限制性内切酶酶切法2利用PCR技术直接扩增目的基因3目的基因的化学合成4通过构建基因组文库或CDNA文库分离目的基因5反向转录法分离目的基因
目的基因导入受体细胞:原核生物最理想受体细胞:大肠杆菌、枯草杆菌、蓝藻、棒状杆菌。真核生物应用最广的受体细胞:酵母细胞
途径:1电穿孔法2基因枪法3激光微束穿孔法4显微注射法5多聚物介导法6脂质体介导转化法
克隆子的筛选鉴定:克隆子的筛选方法:1根据载体选择标记基因2根据报告基因
3根据PCR扩增片段4根据限制性核酸内切酶图谱分析5采用DNA杂交法6应用DNA芯片7DNA核苷酸序列测定
如何从基因文库中获取目的基因